检测原理
本试剂盒由预包被猪伪狂犬gB病毒重组蛋白的酶标板、酶标记物及其他配套试剂组成，应用酶联免疫法原理检测猪血清、血浆样本中猪伪狂犬gB病毒抗体。实验时在酶标板中加入对照血清和待检样本，经温育后若样品中含有猪伪狂犬gB病毒抗体，则将与酶标板上抗原结合，经洗涤除去未结合的其他成分后；再加入酶标记物，与酶标板上抗原抗体复合物发生特异性结合；再经洗涤除去未结合的酶标记物，在孔中加TMB底物液，与酶标结合物反应形成蓝色产物，显色深浅与样品中的特异性抗体含量成正相关；加入终止液终止反应后，产物变为黄色；用酶标仪在450nm波长测定各反应孔中的吸光值，即可知样品是否含有猪伪狂犬gB病毒毒抗体。
试剂盒组成
储存及有效期
2～8℃保存，有效期12个月。
包被板开封后请于2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限为2个月。
适用仪器
含450nm波长的酶标仪，37℃恒温设备，可调微量移液器。
样品准备
1.取动物全血按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血、无污染。样品1周内可于2～8℃保存，长期需置-20℃保存。
2.浓缩洗涤液使用前应恢复至室温使沉淀溶解，然后用蒸馏水或去离子水作20倍稀释成工作洗涤液(如19份蒸馏水或去离子水加1份浓缩洗涤液)。
1.使用前将试剂盒置室温30分钟，恢复至室温。
2.取所需用量酶标板条，设阴性、阳性对照各1孔，未用的板条尽快密封，2～8℃保存。
3.样品孔先加入10ul待检样品，再加入90ul样品稀释液，充分振荡混匀。
4.阴性、阳性对照孔分别加入阴性、阳性对照100μl。
5.混匀，盖好盖板膜，置37℃温箱孵育30分钟。
6.甩去孔内液体，每孔加250ul工作洗涤液，用震荡混匀的方式洗涤60秒后弃去，重复洗涤5次，最后一次拍干液体。
7.每孔加酶标记物100μl，置37℃避光反应30分钟。
8.甩去孔内液体，每孔加250ul工作洗涤液，用震荡混匀的方式洗涤60秒后弃去，重复洗涤5次，最后一次拍干液体。
9.根据样品数量将显色液A与显色液B按等体积比例混匀配置为底物工作液，现配现用。每孔加100ul，置37℃避光反应10分钟。
10.每孔加终止液100μl，混匀，于450nm测定各孔吸光值（OD值）。
参考值
实验正常的情况下，阳性对照OD-阴性对照OD＞0.2。
检验结果的解释
1. S/P＝(样品OD-阴性对照OD)/(阳性对照OD-阴性对照OD)。
2. S/P≥0.4时结果判读为阳性。
3. 0.2＜S/P＜0.4时结果考虑可能存在抗体效价不足或疑似感染。
4. S/P＜0.2时结果判读为阴性。
试验方法的局限性
1. 本试剂盒仅作为定性检测样品中猪伪狂犬gB病毒抗体的粗略评估。
2. 本试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或人体实验。
注意事项
1.实验操作时需戴手套、穿工作衣，严格健全和执行消毒隔离制度，各种实验废弃物都应按传染物处理。
2.终止液具有腐蚀性，应避免接触皮肤和衣物，如不慎接触请立即用大量自来水冲洗。
3.酶标板从冷藏环境中取出时应恢复至室温方可开袋，未用完的酶标板需放入有干燥剂的密封袋中保存。
4.浓缩洗涤液在低温时容易结晶，使用时需恢复至室温以完全溶解。
5.用于检测的样品应保持新鲜。
6.试验结果的判定必须以酶标仪读数为准。
7.底物显色过程中，若有整体显色速度过快的情况，可酌情缩短显色时间，显色时间最长不超过15分钟。
8.不同批号试剂组分不得混用。
