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胶体金快速检测技术在猪瘟净化方面的应用


猪瘟(Classical swine fever CSF)是由猪瘟病毒引起的严重危害养猪业的重大传染病,是世界动物卫生组织(OIE)规定的必须报告的疫病。该病以发病急、持续高热、全身出血和白细胞减少为特征,发病率和死亡率高,猪是其*的易感宿主。


猪瘟对世界各国的养猪业都产生过严重的影响,例如97年荷兰爆发的急性猪瘟导致政府扑杀生猪1200万头,直接经济损失就超过20亿美元。


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一、猪瘟病毒


猪瘟病毒属于黄病毒科瘟病毒属成员,病毒形态呈圆形,有囊膜,直径40~60nm,衣壳呈二十面体对称,内含单股正链RNA基因组,病毒核酸长约12300个核苷酸。猪瘟病毒对环境的抵抗力不强,对干燥、紫外线和脂溶剂均敏感,但是排泄物和组织中的猪瘟病毒抵抗力很强,如粪便中的病毒能在20℃环境下存活2周,猪肉中的病毒能够存活数月乃至一年。


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二、目前流行状况


据中国兽药监察所猪瘟参考实验室介绍,我国虽无猪瘟大爆发,但是31个省市均有猪瘟散发和流行,造成的经济损失依然很严重。在全面实施猪瘟强制免疫的压力下,我国非典型、慢性、隐性猪瘟在逐渐增加。


另外,虽猪瘟疫苗免疫率超过95%以上,但猪瘟免疫合格率也并不像想象中乐观。中国动物卫生与流行病学中心对2010-2014年全国149个猪场共计9534份血清的监测显示,不同的猪群猪瘟抗体阳合格率从41.57%-67.43%。


猪群抗体合格率在不同地区、猪场、不同猪群之间差异明显,离散度大。一个群体抗体合格率要在80%以上,才能抵抗疫病的爆发。种母猪群要求合格率在95%以上;种公猪和后备种猪群要求达到*合格率。而有些猪场免疫后保护水平显然不足以抵抗野毒感染。


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三、猪瘟净化首先要控制传染源


如要做到猪瘟净化,首先要控制传染源。但是,各种报告和报道中显示,不仅病猪/病料中有猪瘟病毒,即便外观健康的猪群也经常可以检测到猪瘟病毒。


另外,也有研究显示,种公猪的精液也存在猪瘟病毒感染情况。即使是未发病的健康猪场,种公猪的精液也有4%的感染率;发病猪场公猪精液的感染率高达30%。


对于健康猪群带毒的原因,临床上猪瘟流行株具有强、中、低不同致病性毒株,是多种因素综合影响的结果。而这种带毒将会造成猪场猪瘟的恶性循环。比如通过种母猪、种公猪水平或垂直传播,使整个群体都在扩散,先天感染的仔猪会形成免疫耐受。


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这种隐性带毒没有症状的特征,对猪瘟的控制产生了严重的影响,所以有些猪场猪瘟病毒一直清除不掉。由于猪瘟病毒主要损伤猪的淋巴器官,对淋巴器官的损伤是持续性的、不可恢复的,因此感染的猪再打疫苗也没有作用。不清除病毒,通过免疫方法净化猪瘟的效果是难以保证的。因此应当从源头上将带毒猪淘汰。


扁桃体是检测慢性猪瘟一个最敏感最方便的组织之一,但是活体采扁桃体比较困难,所以很多猪场只有在发病时才检测猪瘟抗原,平时只检测猪瘟抗体。对于一般猪场尤其是中小型猪场而言,即使采扁桃体样品检测猪瘟抗原,也只能送到各检测中心去检测,因为现行的猪瘟抗原的检测方法主要是荧光染色、各种PCR方法(比如荧光定量PCR、套式或普通PCR)等。这些法对人员、环境、设备等要求比较高,中小型的猪场通常不具备条件且猪瘟病毒感染率常常超过大型的养殖企业。


胶体金快速检测试剂通过纸层析来完成抗原抗体的快速反应,操作简单、快速,对人员、环境、设备等无要求,非常适合基层或现场进行检测。人医临床或家庭常用的早早孕试纸条就是胶体金检测试剂的一种。


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赛诺利康生物有限公司开发的基于胶体金平台的猪瘟病毒抗体快速测试卡,操作简单、快速,能够帮助猪场在现场完场猪瘟病毒的检测或筛查,为猪瘟净化提供依据。


操作简单:只需要三步即可完成,即采集血液分离血清;向胶体金测试卡上滴加血清,再滴加2滴稀释液到加样孔;静止10-15分钟观察结果。


快速:10-15分钟即可完成。


对人员无要求:任何人一看就会,不需要专业的学历。


结果判断:一目了然,易于判断。


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四、定期评估猪瘟抗体水平并及时对免疫程序进行适当的优化


由于各养殖场的管理水平、 营养状态、所用疫苗质量、免疫程序等的差异,导致猪瘟抗体水平参差不齐。另外,再加上多种微生物的混合感染,比如猪瘟可以与蓝耳、伪狂犬、流行性腹泻、副猪嗜血杆菌等病原发生二重、三重甚至多重感染。这种混合感染造成的免疫抑制严重,影响了猪瘟疫苗的免疫效果。


总的来说,定期评估猪瘟抗体效价水平的意义:


评估免疫效果:疫苗免疫后效果到底如何,用事实说话。一个群体抗体合格率要在80%以上,才能抵抗疫病的爆发。而有些猪场免疫后保护水平显然不足以抵抗野毒感染。曾有人在2013年评估不同品牌的猪瘟疫苗,发现抗体阳性率从27%-85%,可见疫苗的质量也是参差不齐的。根据猪瘟抗体的检测结果查缺补漏,及时调整。


优化免疫程序:通常情况下,规模猪场商品猪首免在25-35日龄,二免在60-70日龄;种猪初免在25-35日龄,60-70日龄二免是比较合适的。但是具体免疫的时机,应该通过抗体监测、抗体的消长规律来具体确定并制定符合场内的免疫程序。


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猪瘟病毒抗体快速检测卡


猪瘟抗体的检测原则上以中和抗体为佳,但是中和抗体操作复杂,不利于推广,因此现在常用总抗体的检测代替中和抗体。目前市场上常用的是进口的猪瘟抗体ELISA试剂盒。


赛诺利康生物开发的猪瘟病毒抗体快速检测卡,依然基于胶体金技术平台,胶体金方法与ELISA方法相比:操作简单,一学就会;检测快速,15分钟内出结果;检测报告清晰易懂,不必高深的专业知识。胶体金检测试纸特别适合现场、基层检测使用。


五、结束语


用疫苗免疫进行猪瘟净化前,首先要控制传染源。通过猪瘟病毒抗体快速检测卡或PCR等方法现场筛查阳性猪,必要时采用特异性更好的方法进行确认,根据确认结果决定是否淘汰阳性猪;


定期评估抗体水平,有助于及时优化、调整免疫程序,控制猪瘟感染。猪瘟抗体胶体金测试卡操作简单、快速,非常适合现场、基层使用。