猪流行性腹泻抗原安全检测试剂盒

1 抗原预包被板条 1/2块 7 阴性对照 0.8/1.6ml

2 酶结合物 11/22ml 8 阳性对照 0.8/1.6ml

3 10倍浓缩洗刷液 50/100ml 9 血清稀释板 1/2块

4 显色液 11/22ml 10 封板膜 2/4张

5 样本稀释液 50/100ml 11 阐明书 1份

6 停止液 11ml      

猪流行性腹泻（Porcine Epidemic Diarrhea, PED）病毒抗体检测试剂盒用于检测猪血清中的猪流行性腹泻病毒抗体

需自备的设备及试剂

1.    微量移液器： 0.5μl-10μl、10μl-100μl、100μl-1000μl。

2.    一次性移液器吸头。

3.    量筒：500ml。

4.    96孔板酶标仪。

5.    蒸馏水或去离子水。

6.    洗瓶或洗板机。

样品制备

取动物全血，按惯例办法制备血清，要求血清清亮，无溶血。

洗刷液的预备

浓缩洗刷液运用前应康复至室温，如有盐结晶，摇摆使结晶的盐溶解，然后用蒸馏水或去离子水作10倍稀释。稀释好的洗刷液可在4℃寄存一周左右。

留意事项

1.    试剂盒运用前各试剂应平衡至室温，运用前应摇匀，运用后放回2-8℃。

2.    不同种类、不同批号试剂盒的试剂组分不得混用，运用试剂时应防止试剂污染。

3.    底物和停止液对皮肤和眼可能有刺激性，运用时应该留意防护。

4.    TMB（底物B液）不要露出于强光和防止触摸氧化剂。

5.    检测板拆封后应防止受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥剂放于自封袋中，并赶快置于2-8℃)。

6.    一切废弃物在丢掉之前应合理处理避免污染。

7.    严格遵守操作阐明可以获得*的成果。操作进程中移液、守时和洗刷等的悉数进程有必要准确。

8.         血清稀释板为一次性用品，不得重复运用；血清稀释板的*容量为300μl/孔。

操作过程

1.    取预包被的检测板（依据样品*，可拆开分次运用），将稀释好的待检血清取100μl参加到检测板孔中。一起设阴性对照1孔、阳性及对照2孔，取阴性及阳性对照各100μl

别离参加反响孔中。悄悄振匀孔中样品（勿溢出）。

2.    盖上封板膜（可按实际需要自行裁剪），置37℃温育30分钟。

3.    当心揭开封板膜，甩掉板孔中的溶液，运用作业浓度洗刷液每孔加250ul，后甩去孔内液体，以上过程重复4-6次，*在洁净吸水纸上拍干。

4.    每孔加酶结合物50μl，盖上封板膜，置37℃温育30分钟。

5.    当心揭开封板膜，甩掉板孔中的溶液，洗刷4-6次, 办法同3。牢记*在洁净吸水纸上拍干。

6.    每孔加显色液100μl，混匀、盖上封板膜37℃闭光显色10分钟。

7.    每孔加停止液50μl，使反响停止，10分钟内测定成果。

成果断定

用酶标仪于450nm（630nm作参比波长）读取吸光度OD值。

实验建立的条件是：

阴性对照（N）OD值<0.15，一起阳性对照（P）OD值〉0.4。

计算办法：

样品OD值÷阳性对照OD均值=S/P值

阴阳性判别：

S/P值≥0.35判别为阳性；

S/P值<0.35判别为阴性。