A型口蹄疫抗体检测试剂盒

运用说明书

【介绍】

A型口蹄疫病毒（Foot-and-mouth disease virus, FMDV）抗体检测试剂盒可用于检测猪、牛、羊血清中的A型口蹄疫病毒抗体，用于点评A型口蹄疫苗免疫状况。

本试剂盒选用直接ELISA法，在酶标板条微孔上预包被纯化的FMD病毒抗原。在试验中，参与稀释后的待检血清，经过温育后，若样品中含有FMD病毒特异性抗体，则与包被板上的抗原结合，经洗刷除去未结合的抗体和其他成分后；再参与酶结合物，与检测板上的抗原抗体复合物发生特异性结合；再经洗刷除去未结合的酶结合物；在微孔中参与TMB底物液，经酶催化构成蓝色产品，参与中止液中止反应后，用酶标仪450nm波长测定反应孔中的吸光度A值。

【组份】

【需自备的设备及试剂】

微量移液器： 0.5μl-10μl、10μl-100μl、100μl-1000μl。

一次性移液器吸头。量筒：500ml。96孔板酶标仪。蒸馏水或去离子水。洗瓶或洗板机。

【样品制备】

取动物全血，按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血。

【洗刷液的准备】

浓缩洗刷液运用前应恢复至室温，如有盐结晶，摇晃使结晶的盐溶解，然后用蒸馏水或去离子水作10倍稀释。稀释好的洗刷液可在4℃存放一周左右。

【样品的稀释】

在血清稀释板中按1：100的体积比稀释待检血清。

留心：阴性和阳性对照不用稀释。取每个样品后都要替换吸头，精确记载每个样品在板上的方位。每个样品在参与到包被板微孔前应充分混匀。

【操作进程】

取预包被的检测板（根据样品*，可拆开分次运用），将稀释好的待检血清取100μl参与到检测板孔中。一同设阴性对照和阳性对照各2孔，取阴性及阳性对照各100μl分别参与反应孔中悄然振匀孔中样品（勿溢出）。

盖上封板膜（可按实际需要自行裁剪），置37℃温育30分钟。

留神揭开封板膜，甩掉板孔中的溶液，运用作业浓度洗刷液每孔加250ul，后甩去孔内液体，以上进程重复4-6次，终究在洁净吸水纸上拍干。

每孔加酶结合物100μl，盖上封板膜，置37℃温育30分钟。

留神揭开封板膜，甩掉板孔中的溶液，洗刷4-6次, 方法同3。紧记终究在洁净吸水纸上拍干。

每孔加显色液100μl，纤细轰动混匀、盖上封板膜37℃闭光显色10分钟。

每孔加中止液50μl，使反应中止，10分钟内测定效果。

【效果判定】

用酶标仪于450nm（630nm作参比波长）读取吸光度OD值。

试验树立的条件是：

阴性对照（N）OD值<0.20，一同阳性对照（p）od值>0.3。

核算方法：

（样品OD值-阴性OD均值）÷（阳性对照OD均值-阴性OD均值）=  IRPC值

阴阳性判别：

IRPC<0.4判为阴性;0.4≤IRPC<0.45判为可疑；IRPC≥0.45则判别为阳性。

【有效期】

贮存方法： 2 - 8oC下贮存有效期为 12个月。