猪流行性腹泻抗体检测试剂盒

1 抗原预包被板条 1/2块 7 阴性对照 0.8/1.6ml

2 酶结合物 11/22ml 8 阳性对照 0.8/1.6ml

3 10倍浓缩洗刷液 50/100ml 9 血清稀释板 1/2块

4 显色液 11/22ml 10 封板膜 2/4张

5 样本稀释液 50/100ml 11 说明书 1份

6 中止液 11ml      

猪流行性腹泻（Porcine Epidemic Diarrhea, PED）病毒抗体检测试剂盒用于检测猪血清中的猪流行性腹泻病毒抗体

需自备的设备及试剂

1.    微量移液器： 0.5μl-10μl、10μl-100μl、100μl-1000μl。

2.    一次性移液器吸头。

3.    量筒：500ml。

4.    96孔板酶标仪。

5.    蒸馏水或去离子水。

6.    洗瓶或洗板机。

样品制备

取动物全血，按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血。

样品的稀释

在血清稀释板中按1：99的体积比稀释待检血清（例如：495μl样品稀释液中加5μl待检血清）。

留心：阴性和阳性对照不用稀释。取每个样品后都要替换吸头，精确记载每个样品在板上的方位。每个样品在参与到包被板微孔前应充分混匀。

操作进程

1.    取预包被的检测板（根据样品*，可拆开分次运用），将稀释好的待检血清取100μl参与到检测板孔中。一同设阴性对照1孔、阳性及对照2孔，取阴性及阳性对照各100μl

分别参与反应孔中。悄然振匀孔中样品（勿溢出）。

2.    盖上封板膜（可按实际需要自行裁剪），置37℃温育30分钟。

3.    留神揭开封板膜，甩掉板孔中的溶液，运用作业浓度洗刷液每孔加250ul，后甩去孔内液体，以上进程重复4-6次，*在洁净吸水纸上拍干。

4.    每孔加酶结合物50μl，盖上封板膜，置37℃温育30分钟。

5.    留神揭开封板膜，甩掉板孔中的溶液，洗刷4-6次, 方法同3。紧记*在洁净吸水纸上拍干。

6.    每孔加显色液100μl，混匀、盖上封板膜37℃闭光显色10分钟。

7.    每孔加中止液50μl，使反应中止，10分钟内测定效果。

效果判定

用酶标仪于450nm（630nm作参比波长）读取吸光度OD值。

试验树立的条件是：

阴性对照（N）OD值<0.15，一同阳性对照（P）OD值〉0.4。

核算方法：

样品OD值÷阳性对照OD均值=S/P值

阴阳性判别：

S/P值≥0.35判别为阳性；

S/P值<0.35判别为阴性。