A型口蹄疫抗体检测试剂盒

运用阐明书

【介绍】

A型口蹄疫病毒（Foot-and-mouth disease virus, FMDV）抗体检测试剂盒可用于检测猪、牛、羊血清中的A型口蹄疫病毒抗体，用于评价A型口蹄疫苗免疫情况。

本试剂盒选用直接ELISA法，在酶标板条微孔上预包被纯化的FMD病毒抗原。在实验中，参加稀释后的待检血清，通过温育后，若样品中含有FMD病毒特异性抗体，则与包被板上的抗原结合，经洗刷除掉未结合的抗体和其他成分后；再参加酶结合物，与检测板上的抗原抗体复合物发作特异性结合；再经洗刷除掉未结合的酶结合物；在微孔中参加TMB底物液，经酶催化构成蓝色产品，参加停止液停止反响后，用酶标仪450nm波长测定反响孔中的吸光度A值。

【组份】

【需自备的设备及试剂】

微量移液器： 0.5μl-10μl、10μl-100μl、100μl-1000μl。

一次性移液器吸头。量筒：500ml。96孔板酶标仪。蒸馏水或去离子水。洗瓶或洗板机。

【样品制备】

取动物全血，按惯例办法制备血清，要求血清清亮，无溶血。

【洗刷液的预备】

浓缩洗刷液运用前应康复至室温，如有盐结晶，摇摆使结晶的盐溶解，然后用蒸馏水或去离子水作10倍稀释。稀释好的洗刷液可在4℃寄存一周左右。

【样品的稀释】

在血清稀释板中按1：100的体积比稀释待检血清。

留意：阴性和阳性对照不必稀释。取每个样品后都要替换吸头，准确记载每个样品在板上的方位。每个样品在参加到包被板微孔前应充沛混匀。

【留意事项】

试剂盒运用前各试剂应平衡至室温，应将试剂盒各组份放置室温至少1小时以上。运用前应摇匀，运用后放回2-8℃。

不同种类、不同批号试剂盒的试剂组分不得混用，运用试剂时应防止试剂污染。

底物和停止液对皮肤和眼可能有刺激性，运用时应该留意防护。

TMB（显色液）不要露出于强光和防止触摸氧化剂。

检测板拆封后应防止受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥剂放于自封袋中，并赶快置于2-8℃)。

一切废弃物在丢掉之前应合理处理避免污染。

严格遵守操作阐明可以获得很好的成果。操作进程中移液、守时和洗刷等的悉数进程有必要准确。

血清稀释板为一次性用品，不得重复运用；血清稀释板的*容量为300μl/孔。

【操作过程】

取预包被的检测板（依据样品*，可拆开分次运用），将稀释好的待检血清取100μl参加到检测板孔中。一起设阴性对照和阳性对照各2孔，取阴性及阳性对照各100μl别离参加反响孔中悄悄振匀孔中样品（勿溢出）。

盖上封板膜（可按实际需要自行裁剪），置37℃温育30分钟。

当心揭开封板膜，甩掉板孔中的溶液，运用作业浓度洗刷液每孔加250ul，后甩去孔内液体，以上过程重复4-6次，最终在洁净吸水纸上拍干。

每孔加酶结合物100μl，盖上封板膜，置37℃温育30分钟。

当心揭开封板膜，甩掉板孔中的溶液，洗刷4-6次, 办法同3。牢记最终在洁净吸水纸上拍干。

每孔加显色液100μl，细微震动混匀、盖上封板膜37℃闭光显色10分钟。

每孔加停止液50μl，使反响停止，10分钟内测定成果。

【成果断定】

用酶标仪于450nm（630nm作参比波长）读取吸光度OD值。

实验建立的条件是：

阴性对照（N）OD值<0.20，一起阳性对照（P）OD值>0.3。

计算办法：

（样品OD值-阴性OD均值）÷（阳性对照OD均值-阴性OD均值）=  IRPC值

阴阳性判别：

IRPC<0.4判为阴性;0.4≤IRPC<0.45判为可疑；IRPC≥0.45则判别为阳性。

【有效期】

储存办法： 2 - 8oC下储存有效期为 12个月。