|
| 产地 | 北京 |
| 保存条件 | |
| 品牌 | 赛诺利康 |
| 货号 | |
| 用途 | |
| 检测方法 | 血液、粪便或泄殖腔拭子 |
| CAS编号 | |
| 保质期 | |
| 适应物种 | |
| 检测限 | |
| 数量 | |
| 包装规格 | 25T/50T |
| 标记物 | |
| 纯度 | % |
| 样本 | |
| 应用 | |
| 是否进口 | 否 |
【产品名称】
通用名称：禽流感病毒（H5、H7、H9型）检测试剂盒（三色实时荧光PCR法）
英文名称：Avian Influenza Virus（H5、H7、H9）Detection Kit (Real-Time PCR Method)
【包装规格】25头份/盒 & 50头份/盒
【预期用途】
本试剂盒适用于禽流感病毒H5、H7、H9亚型检测，可用于临床禽流感感病毒H5、H7、H9亚型感染的辅助诊断，但不作确诊使用。
【检验原理】
本试剂盒针对禽流感病毒的高度保守区域设计特异性引物和探针，在反应体系中含禽流感病毒基因组模板的情况下，PCR反应得以进行并释放荧光信号。利用荧光定量PCR仪对PCR过程中相应通道信号进行实时监测和输出，实现检测结果的定性分析。
【主要组成成份】
序号 | 组成 | 25头份/盒 | 50头份/盒 |
1 | 禽流感H5、H7、H9 RT-PCR反应液 | 375 μL×1管 | 750 μL×1管 |
2 | 禽流感H5、H7、H9逆转录酶 | 50 μL×1管 | 100 μL×1管 |
3 | 禽流感H5、H7、H9 Taq酶 | 75 μL×1管 | 150 μL×1管 |
4 | 禽流感H5、H7、H9阳性对照 | 40 μL×1管 | 40 μL×1管 |
5 | 禽流感H5、H7、H9阴性对照 | 40 μL×1管 | 40 μL×1管 |
6 | 说明书 | 1份 | 1份 |
注：阴性对照为人基因组DNA，阳性对照为失去活性的禽流感病毒H5、H7、H9 cDNA。
【储存条件及有效期】避光-20℃以下保存，避免反复冻融，有效期12个月。
【适用仪器】ABI 系列、Bio-Rad系列、Agilent Stratagene MX系列 、Roche LightCycler R480、Cepheid SmartCycler、Rotor-Gene系列、杭州博日系列等多通道实时荧光定量PCR仪。
【样本要求】
1.样本为鼻腔或咽部分泌物、疱疹分泌物、血清、肛拭子样本。
2.样本采集后应立即检测，若不能立即检测，应置于-80℃冷冻保存，避免反复冻融，用干冰或液氮运输。
【检验方法】
1. 试剂准备（试剂准备区）
（1）从冰箱中取出试剂盒, 从试剂盒中取出实验所需试剂,充分融化混匀并瞬时离心以去除管壁附着液体。
（2）核算当次实验所需要的反应数（n），并根据如下表所示反应体系计算当次实验所需要的各种试剂量。
n =阴性对照数（1T）+阳性对照数（1T）+误差预留量（1T）+样本数
单反液配制表(每头份) | RT-PCR反应液 | 15.0 μL |
逆转录酶 | 2.0 μL | |
Taq酶 | 3.0 μL |
(3)在无菌离心管中加入上述试剂，充分混匀后瞬时离心。按照20 μL/管分装量将试剂分装至PCR反应管。
2.样本准备（样本处理区）
用QIAGEN、Roche公司RNA提取试剂盒提取RNA，具体操作按照其试剂盒说明书操作。
3.加样
在上述制备好的PCR反应样本管中分别加入处理好的待测标本RNA各5 μl、终体积25 μl/管，盖好PCR反应盖混匀后瞬时低速离心，转移到PCR仪器上。阴性对照和阳性对照管则各加5 μL试剂盒自带的阴性对照或阳性对照品，终体积为25 μl/管，盖好PCR反应盖混匀后瞬时低速离心，转移到PCR仪器上。
4.PCR（PCR扩增区）
（1）取样本处理区准备好的PCR反应管，放置在实时荧光定量PCR仪样品槽相应位置，并记录放置顺序。
（2）按下表设置仪器核酸扩增相关参数进行PCR扩增。
反应体积 | 25 μL | 通道选择 | FAM通道采集禽流感病毒H5荧光信号 HEX通道采集禽流感病毒H7荧光信号 ROX通道采集禽流感病毒H9荧光信号 |
PCR 反应 条件 | 步骤 | 条件 | 循环数 |
反转录 | 42℃：10分钟（min） | 1 | |
预变性 | 95℃：3分钟（min） | 1 | |
预扩增 | 95℃：5秒（s） | 5 | |
55℃：40秒（s） | |||
PCR扩增 | 95℃：5秒（s） | 40 | |
55℃：40秒（s） （此阶段结束时采集荧光信号） |
【参考值（参考范围）】1.试剂盒有效性判定：
（1）阳性对照：有典型S型扩增曲线或Ct值≤35。（2）阴性对照：Ct值＞38或无Ct值，线形为直线或轻微斜线，无指数增长期。2.标本结果判定：（1）阳性：标本检测结果Ct值≤35或有明显指数增长期。（2）可疑：标本检测结果Ct值在35～38范围内。此时应对标本进行重复检测，如重复实验结果Ct值仍在35～38范围内，有明显指数增长期，则判定为阳性，否则为阴性。（3）阴性：标本检测结果Ct值＞38或无Ct值。
