猪细小病毒抗体检测试剂盒

需自备的设备及试剂

1. 微量移液器： 0.5μl-10μl、10μl-100μl、100μl-1000μl。

2. 一次性移液器吸头。

3. 量筒：500ml。

4. 96孔板酶标仪。

5. 蒸馏水或去离子水。

6. 洗瓶或洗板机。

样品制备

取动物全血，按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血。

洗涤液的准备

浓缩洗涤液使用前应恢复至室温，如有盐结晶，摇动使结晶的盐溶解，然后用蒸馏水或去离子水作10倍稀释。稀释好的洗涤液可在4℃存放一周左右。

样品的稀释

在血清稀释板中按1：100的体积比稀释待检血清。

注意：阴性和阳性对照不用稀释。取每个样品后都要更换吸头，准确记录每个样品在板上的位置。每个样品在加入到包被板微孔前应充分混匀。

操作步骤

1. 取预包被的检测板（根据样品*，可拆开分次使用），将稀释好的待检血清取100μl加入到检测板孔中。同时设阴性对照1孔，阳性对照2孔，取阴性及阳性对照各100μl分别加入反应孔中轻轻振匀孔中样品（勿溢出）。

2. 盖上封板膜（可按实际需要自行裁剪），置37℃温育30分钟。

3. 小心揭开封板膜，甩掉板孔中的溶液，使用工作浓度洗涤液每孔加250ul，后甩去孔内液体，以上步骤重复4-6次，*在干净吸水纸上拍干。

4. 每孔加酶结合物50μl，盖上封板膜，置37℃温育30分钟。

5. 小心揭开封板膜，甩掉板孔中的溶液，洗涤4-6次, 方法同3。切记*在干净吸水纸上拍干。

6. 每孔加显色液100μl，轻微震荡混匀、盖上封板膜37℃闭光显色10分钟。

7. 每孔加终止液50μl，使反应终止，10分钟内测定结果。

结果判定

用酶标仪于450nm（630nm作参比波长）读取吸光度A值。

试验成立的条件是：

阴性对照（N）OD值<0.20，同时阳性对照（P）OD值〉0.4。

计算方法：

样品OD值÷阳性对照OD均值=S/P值

阴阳性判断：

S/P值≥0.4判断为阳性；

S/P值<0.4判断为阴性。