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技术|临床猪病诊断和抗体检测简单实用的方法——快速检测卡

在现代规模化养猪生产中,虽然采取了各种良好的饲养管理和防疫措施,但疾病仍时有发生,很多时候会造成严重损失。为降低疾病的发生,为疫苗免疫做好科学的指导,非常有必要了解猪体内的有效抗体水平,这就必须开展抗体水平监测。


目前对抗体水平检测的方法很多,如ELISA检测法、DOT-ELISA检测法和间接血凝法等,这些检测技术虽然具有微量、特异的优点,但对检测条件、设备配备和人员操作的技术水平要求较高,而且检测时间长,检测程序繁琐,检测成本很高,不适合基层兽医和养殖场使用。


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快速抗体检测试纸基于胶体金免疫层析技术,其检测结果的特异性及灵敏度大大提高,而且样品不必预处理,也大大降低了实验过程中的人为误差和工作强度。

实际操作中只需要按照产品说明进行简单的操作,不需要任何额外配备仪器设备,已广泛应用在医学检验和农牧业生产中,适用于不同的检疫和诊断机构,更适合于基层兽医及养殖场使用,为动物疫病的早期诊断和适时免疫提供了新的技术手段。


一、原理说明(以猪瘟为例)


猪瘟抗体快速检测试纸采用酶联免疫原理和胶体金层折技术制成,快速检测猪血清中的猪瘟抗体,当血清加入加样孔内,由于层析的原理,血清开始沿纸条移动挡遇上干燥的金标抗原,将其溶解,并带着金标抗原继续往上移动,至硝酸纤维素膜的检测线。如果样品中有猪瘟抗体存在时,会与玻璃纤维素膜上的金标猪瘟抗原和包被在检测线上的猪瘟抗原,在检测线(T)上形成一个夹心的免疫复合物,呈一条紫红色线。样品中的抗体越高,色线颜色越深,判定为阳性。


如果样品中没有猪瘟抗体,在检测线(T)上没有色带出现,判定为阴性。样品和金标抗原继续往上移至质控线(C)时,此处的兔抗瘟抗体将会同金标猪瘟抗原结合,在质控线(C)上形成一条紫红色线,证明本试纸有效。整个试验仅需10-15分钟。操作简便,快速,灵敏度高,准确率达98%以上,直观,结果容易判定。口蹄疫、伪狂犬、蓝耳病检测原理同猪瘟。


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二、猪病抗体快速检测卡使用方法


【样本要求】


1.本检测卡仅适用于检测猪血清/全血。


2. 血清:按常规方法抽取2-3ml血液置洁净干燥的试管中,静置约1小时待血液凝固后于4000转/分钟离心10 分钟(也可将血液静置约2小时,待血液凝固自然析出血清),分离血清。要求血清清亮,无溶血、无污染。血清样本短期可于2~8℃保存,长期需置-20℃保存。


3. 全血:采集新鲜抗凝全血当天使用,未加抗凝剂的全血现采现用。


【试验方法】


1.血清/全血加样方式:撕开检测卡铝箔包装袋,取出检测卡,放于平整、洁净的台面上,使用袋内吸管取1滴血清或2滴全血缓慢滴加到加样孔内,再滴加2滴稀释液到加样孔。


2. 室温下放置,10-15 分钟判断结果,15 分钟后的显色结果无效。


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【结果判断】


1.阴性:在观察孔内,只有对照线区(C)出现一条紫红色线。


2. 阳性:在观察孔内,检测线区(T)及对照线区(C)同时出现紫红色线。抗体滴度越高,检测线(T)颜色越深。


3. 无效:在观察孔内,对照线区(C)不出现紫红色线。


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【诊断参考】


1、  如果该猪未接种过猪瘟病毒疫苗:


A. 当被检样品检测线 T 处无明显色带出现,该样本中不含有猪瘟病毒抗体,如果种群健康,则表示没有猪瘟病毒感染,应当及时进行猪瘟病毒疫苗接种。如果出现相应的急性症状,则不能排除有猪瘟病毒感染。


B. 当被检样品检测线 T 处有明显色带出现,则该动物存在猪瘟病毒感染,或既往感染,应进一步验证。


2、 如果该猪已接种过猪瘟病毒疫苗:


A. 当被检样品检测线 T 条带的色泽≥对照卡中 1:32 效价时,说明猪瘟病毒抗体的滴度较高,已达到抵御野毒攻击的保护水平,同时说明感染野毒的可能性较小。


B. 当被检样品检测线T 条带的色泽<对照卡中 1:32 效价时,说明猪瘟病毒抗体效价未达到抵御猪瘟病毒野毒攻击的*保护滴度,存在感染野毒的风险,建议进行疫苗补种。


3、检测范围


外调种猪须逐个检测,育肥猪按10%-15%比例抽检。


自繁种猪检测,猪瘟效价应不低于1:32,抽检比例为10%-20%。


仔猪出生首日-5日龄,测其母源抗体,首免后15-20天,二免后10-15天进行抗体检测,检测比例为3%-5%,猪瘟效价不能低于1:32。


4、注意事项


检测卡从铝箔袋取出后应尽快使用,受潮后检测卡将失效。


检测卡应在30℃以下保存,不可冷冻,保存有效期为24个月。


口蹄疫、伪狂犬、蓝耳病抗体检测卡使用方法同猪瘟。


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三、检测卡在现代养猪保健中的作用


1、检测卡可用于检验猪瘟疫苗的质量和确定免疫的最适剂量


如养猪场购买大批量的猪瘟疫苗放在自己场里的冰箱冷冻层内,每次*购买同一批号(一般以生产日期定批号)的猪瘟疫苗。可以从中取出一瓶疫苗,选择不同日龄的乳猪、小猪、种猪若干头,分别应用2头份、3头份、4头份、5头份猪瘟疫苗进行免疫接种,免疫15天后采血,用抗体免疫金标检测卡测定抗体滴度。


如果各组都能产生抵抗猪病强毒攻击的免疫抗体时,则可以从中选择免疫头份少,抗体滴度高作为本批号疫苗*免疫剂量。如果检测的猪瘟抗体达不到强毒攻击的*保护强度时,则应当检查是否是疫苗本身问题,还是猪群存在有免疫抑制病毒(如圆环病毒)的干扰。这时可以采取更换该厂家不同批号的猪瘟疫苗或另选厂家的猪瘟疫苗,再按上述方法进行不同剂量免疫,来确定是否是该批疫苗失效或是免疫抑制病毒的干扰,判定适宜的免疫剂量。


2、当母猪分娩时,用猪瘟抗体快速检测卡检测母猪的抗体水平


如果在试纸条上只出现1条色线(质控线C),说明母猪体内的猪瘟抗体滴度已低于抵抗猪瘟强毒攻击的*保护强度,母猪应当及时进行猪瘟疫苗接种,同时乳猪应当及时采用超前免疫,以免发生猪瘟病。如果试纸条上出现2条色线,说明猪体内的猪瘟抗体滴度较高,可以抵抗猪瘟强毒的攻击,就不需要进行超前免疫。因为仔猪可以通过初乳获得母源抗体,这时仔猪可以按照正常的免疫程序进行预防注射。


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3、外购仔猪或者种猪时检测抗体状况和免疫情况


当从外地购进大批量的小猪或种猪时,饲养主自己无法了解购买的小猪是否进行过猪瘟疫苗免疫或免疫是否有效,应使用检测卡。为了防止猪瘟病发生,选择什么时间再进行猪瘟免疫最适宜时,则可以根据不同地区、不同日龄的猪,选择有代表性的猪采血,应用猪瘟抗体免疫金标检测卡进行快速检测。通过检测结果,可以了解整个猪群猪瘟抗体的状况,以便决定是否及时开展免疫及选择适宜的免疫剂量,这样可以避免猪瘟病的发生。


4、在怀疑发生猪瘟病时,可以采集病猪血清(或血液)用猪瘟抗体快速检测卡检测


如果发生猪瘟病,猪体血液中没有猪瘟抗体或抗体滴度很低。当然,发生猪瘟而耐过不死的猪,抗体滴度可能会很高。其他疾病(伪狂犬、圆环、蓝耳、口蹄疫)检测道理同猪瘟病的检测方法。


5、进行疫病监测时,可应用抗体免疫金标检测卡进行快速检测


如猪场发生猪瘟病时,常规的处理程序是全面隔离消毒和紧急预防注射。此时猪群特别是种猪场的猪群的抗体滴度差异很大,紧急预防注射疫苗后的抗体滴度水平又会出现明显的差异。因此,还应当重新了解猪瘟抗体水平,以制定合理的免疫程序,确保猪场的科学保健。