猪O型口蹄疫(FMD)是由O型口蹄疫病毒(FMDV)引起的猪的一种急性、热性、高度触摸性流行症。除感染猪外,还可感染牛、羊等偶蹄动物。该病传播敏捷,发病率高,是国际动物卫生组织(OIE)规
定有必要陈述的流行症之一,中国政府规定为一类动物疫病。该病不光引起幼畜死亡,生产功能下降,并且严重影响牲畜及畜产品流转和交易活动。
口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus, FMDV抗体检O型口蹄疫病毒抗体,用于评估口蹄疫苗免疫状况。
ELISA法,在酶标板条微孔上预包被口蹄疫病毒抗原。在试验中,加入稀释后的待检血清VP1单抗,样本中的抗体阻断了单抗与包被板上抗原的结合;经洗涤除去未结合的酶结合物;在微孔中加入TMB底物液,经酶催化产生的蓝色信号与样本中的抗体含量成反比,加入终止液终止反应后,用酶标仪450nm波长测定反应孔中的吸光度A值。
组份
1 | 1/2块 | 6 | 6/11ml |
2 | 11/22ml | 7 | 1/2ml |
3 | 50/100ml | 8 | 0.5ml/1ml |
4 | 11/22ml | 9 | 2/4张 |
5 | 100ml | 10 | 1份 |
自备的设备及试剂
微量移液器:μμμμ2. 一次性移液器吸头。
量筒:4. 96孔板酶标仪。
6. 洗瓶或洗板机。
样品制备
洗涤液的准备
10倍稀释。稀释好的洗涤液可在4℃存放一周左右。
注意事项
,应将试剂盒各组份放置室温至少。
3. 底物和终止液对皮肤和眼可能有刺激性,使用时应该注意防护。
5. 检测板拆封后应(未用完的抗原包被板加干燥剂放于自封袋中,并尽快置于2-8℃6. 所有废弃物在丢弃之前应合理处理以免污染。
8. 抗原包被板为一次性用品,不得重复使用;
操作步骤
每次试验均设置阳性对照2. 将样品稀释液按/孔加入到微孔反应板内,之后将待检样品血清按/孔加入孔内并吹打混匀(移液器枪头请勿混用);
盖上封板膜(可按实际需要自行裁剪),置4. 250ul,后甩去孔内液体,以上步骤重复4-6次,*在干净吸水纸上拍干。
每孔加酶结合物1. 4-6次, 方法同4。切记*在干净吸水纸上拍干。
每孔加显色液μ3. 50μl,使反应终止,10分钟内测定结果。
结果判定
作参比波长)读取吸光度试验:
(N)OD值>0.5,同时阳性对照(P)阻断率>50%;
PI (阻断率)= 1 —(样品OD值 ÷ 阴性OD均值)
牛、羊样本
PI≤45%则判断为阴性。
PI(阻断率)>35%则判断为阳性;
贮存方法 2 - 8oC下贮存。